染色法
【酸性色素】
・負に帯電、アルコールより水に溶けやすく細胞質に適する
・エオジン、ライト緑、ピクリン酸、酸フクシン、オレンジG
【塩基性色素】
・正に帯電、アルコールに溶けやすい、核染
・メチル青、メチル緑、ゲンチアナ紫、チオニン、トルイジン青
【間接染色】
・染色前に媒染剤(Al、クロム、Fe等の水酸化物)で処理後に染色
【異染色性】
・メタクロジア 粘液軟骨基質、アミロイド、肥満細胞顆粒
【ホルマリン色素】
・長期間ホルマリン固定による褐色結晶状粒子
・メトヘモグロビンである
・pH3〜5で沈着が著しい
・除去法
カルダセウィッチ法(70%アルコール+アンモニア水)
ベロケイ法(80%アルコール+KOH)
【封入】
・ビオライト−屈折率1.5
・カバーガラス−0.12〜0.17mm
・親水性封入剤−グリセリン、ゼラチン(脂肪染色)
普通染色(HE染色)
HE(ヘマトキシリン-エオジン)染色
【核染】
・ヘマトキシリン
・進行性(マイヤー、リリーマイヤー)
・退行性(カラッチ、ギル、ハリス)
・マイヤー(抱水クロラール、結晶クエン酸、カリウムミョウバン、ヨウ素酸Na)
・カラッチ(グリセリン、純アルコール、カリウムミョウバン、ヨウ素酸Na)
・ギル (硫酸Al)
・ハリス(純エタノール、カリウムミョウバン、酸化第二水銀)
【色だし】
・中性にし赤〜藍色へ
【脱色分別】
・塩酸水(ギル)、塩酸アルコール
【細胞質、線維】
・エオジン(好酸) 赤
【脱水-透徹-封入】
【結果】
・核 紫青色
・その他 淡紅色
結合組織、線維(弾性線維、膠原繊維、細網線維)の染色
【膠原繊維】
1.アザン染色
アゾカルミンG ⇒ 核、筋線維
アニリンブルー ⇒ 膠原繊維
2.MT(マッソントリクローム)染色
ワルゲルトの鉄ヘマトキシリン ⇒ 核
ポソーキシリジン、酸フクシン、アゾフロキシン ⇒ 筋、細胞質
アニリンブルー ⇒ 膠原繊維
オレンジG ⇒ 赤血球
3.マッソン・ゴードナー変法
MTのアニリンブルーの代わりにライトグリーンで膠原繊維を緑に染める
4.VG(ワンギーソン)染色
ワルゲルトの鉄ヘマトキシリン ⇒ 核
ワンギーソン液
ピクリン酸 ⇒ 筋、細胞質
酸フクシン ⇒ 膠原繊維
【膠原+弾性繊維】
1.EVG(エラスチカワンギーソン)染色
ワイゲルトのレゾルソンフクシン(塩基性) ⇒ 弾性線維
鉄ヘマトキシリン ⇒ 核
ワンギーソン液
ピクリン酸 ⇒ 筋、細胞質
酸フクシン ⇒ 膠原繊維
【弾性繊維】
1.ワイゲルト染色
ワイゲルトのレゾルソンフクシン(塩基性) ⇒ 弾性線維
ケルンエヒロート ⇒ その他
2.オルセイン染色(HBV)
3.ビクトリア青(HBV)
4.ゴモリのアルデヒドフクシン(内分泌 下垂体β、ラ氏島β)
【細網線維】
1.渡辺の鍍銀法
アンモニア銀 ⇒ 細網線維(黒)
塩化金 ⇒ 膠原繊維(黒褐色)
2.PAM染色
過ヨウ素酸 ⇒ 酸化
メセナミン銀 ⇒ 細網、基底膜、真菌(黒)
多糖体と粘液の染色
【固定】
・カルノア液
・純エタノール
・(ブアン)
※核、グリコーゲン、粘液多糖体、水溶性のため無水を使用(ホルマリン×)
【中性および酸性の一部】
1.PAS染色(過ヨウ素酸シッフ反応)
0.5%過ヨウ素酸 ⇒ 酸化、アルデヒド基露出
シッフ試薬 ⇒ グコーゲン、中性粘液
ヘマトキシリン ⇒ 核
※PAS陽性・・・グリコーゲン、中性粘液多糖体、線維素、基底膜等
※応用・・・軟骨基質、甲状腺コロイド、糸球体基底膜、卵巣濾胞液、
フィブリノイド変性、赤痢アメーバ、真菌、クリプトコッカス等
【酸性−中性】
1.AB−PAS染色
アルシアン青 ⇒ 酸性粘液
0.5%過ヨウ素酸 ⇒ 酸化、アルデヒド基露出
シッフ試薬 ⇒ グコーゲン、中性粘液
ヘマトキシリン ⇒ 核
※腸 ⇒ 青 、胃 ⇒ 赤
※基底膜、免疫複合体沈着(糸球体腎炎)、クリプトコッカス
【酸性】
1.アルシアン青染色
アルシアン青 ⇒ 酸性粘液
ケルンエヒロート ⇒ 核
2.トルイジン青染色
トルイジン青 ⇒ 酸性粘液
メタクロマジー(異染色性)
塩基性タール色素+酸性粘液多糖体で呈する
3.コロイド鉄染色
水酸化第二鉄(コロイド状)
フェロシアン化カリウム
(コロイド鉄+酸性粘液多糖体)+(フェロシアン化K+HCl)
間接的に鉄を検出しベルリン青に
【上皮性】
1.マイヤーのムチカルミン染色
ヘマトキシリン
ムチカルミン ⇒ 赤
※腺癌(印環癌など)、クリプトコッカス莢膜
脂肪染色
【目的】
・脂肪変性
・脂肪腫瘍(脂肪腫、脂肪肉腫など)
・炎症(脂肪織炎や脂肪肉芽腫など、脂肪肉腫との鑑別)
・その他(リポフスチンの証明、動脈硬化など)
【染色】
ホルマリン ⇒ 急速凍結 ⇒ クリオスタット ⇒ 染色 ⇒ 親水性封入剤
(×−アルコール固定、パラフィン包埋、脱水、透徹)
【脂肪染色】
1.ズダン系
・ズダンV、W
・ズダン黒
・ズダンU(オイル赤O)
2.ナイル青
TG、CHO ⇒ 赤
PL、糖脂肪酸 ⇒ 青
内分泌
1.下垂体前葉染め分け
HE、MT、AZAN
2.ゴモリのアルデヒドフクシン染色
下垂体β細胞、ラ氏島β細胞 ⇒ 紫
3.グリメリウス染色(硝酸銀)
ラ氏島α細胞、甲状腺C細胞、カルチノイド
核酸染色
【固定】
純エタノール、カルノア
1.フォイルゲン反応
DNA証明(特異性が高い)
60°1N−HCl
シッフ試薬 ⇒ DNA
ライト緑 ⇒ 背景
2.メチル緑・ピロニン染色(ウンナパッペンハイム)
メチル緑 ⇒ DNA
ピロニン ⇒ RNA
※RNAse消化試験を併用し、RNA消失を確認
ミエローマ
神経組織染色
1.ニッスル小体(リボゾーム、粗面小胞体)
・ニッスル染色(トルイジン青、チオニン、クレシル紫)
2.神経原線維
・ボディアンの鍍銀法
プロテイン銀 ⇒ 軸索、原線維
3.髄鞘、ニッスル小体
・クリューババレラ染色
ルクソールファースト青 ⇒ 髄鞘
クレシルバイオレット ⇒ ニッスル小体、神経細胞、神経膠細胞
4.神経膠細胞
・ホルツァー染色
クリスタルバイオレット ⇒ 神経膠細胞
・PTAH(リンタングステン酸・ヘマトキシリン)染色
横紋筋、線維素(フィブリン)の染色
神経膠細胞と結合組織を区別(腫瘍、脳軟化症)
その他染色
【細胞診 】
1.パパニコロウ染色
・核・・・ヘマトキシリン
・細胞質・・・オレンジG、ライトグリーン、エオジン
2.メイギムザ(パッペンハイムの二重染色法)
・メイングリュンワルド液
・ギムザ液(メチレン青、エオジン)
【生体内色素】
1.ヘモジデリン
・ベルリン青
2.胆汁色素
・グメリン反応
・スタインのヨード法
3.リポフスチン
・シュモール反応
・ズダン黒
・PAS染色
・チールネルゼン
4.メラニン
・マッソンフォンタナ法
・シュモール反応
・ドーパ反応
【無機物】
1.鉄染色
・二価−ターンブル青
・三価−ベルリン青
2.カルシウム
・コッサ反応(硝酸銀)
【病原体】
1.一般細菌
・グラム染色
2.結核菌
・チールネルゼン染色
・蛍光染色
3.マラリア原虫
・ギムザ染色
免疫染色
【蛍光抗体法】
・FITC
・RITC
【酵素抗体法】
・PAP法(ペルオキシダーゼ)
・ABC法(アビジン・ビオチン)
・LSAB法(ストレプトアビジン