臨床検査技師 国家試験対策 勉強法ノート

微生物の染色

単染色

 レフレルのメチレンブルー

グラム染色

 1.塗抹、乾燥、固定
 2.ハッカーのクリスタルバイオレット
 3.水洗
 4.ルゴール液
 5.水洗
 6.脱色(純エタノール)
 7.水洗
 8.サフラニン
 9.水洗、鏡検

抗酸染色

 チールネルゼン染色(加熱、チールの石炭酸フクシン、3%塩酸アルコール)

芽胞染色

 ウイルツ法(マラカイト緑、サフラニン)
 メラー法
 バシラス、クロストリジウム

異染小体染色

 ナイセル法
 ジフテリア

鞭毛染色

 レイフソン法
 コレラ、緑膿菌、腸内細菌

莢膜染色

 ヒス法(ゲンチアナ紫、フクシン)
 肺炎球菌、肺炎桿菌、インフルエンザ

墨汁法

 クリプトコッカス検出

培地と試験

非選択培地
普通寒天培地
血液寒天培地
チョコレート寒天培地
BTB乳糖加寒天培地

 

選択分離培地
マンニット食塩培地

 要滅菌、耐・好塩性菌発育
 Sta.aureus
 C-マンニット、pH-フェノールレッド、選択-7.5%NaCl 

Staphylococcus No110培地

 要滅菌、耐・好塩性菌発育
 Sta.aureus
 C-マンニット、pH-BTB、選択-7.5%NaCl
 食塩耐性、マンニット分解能、ゼラチン液化能、色素産生能  

EF寒天培地

 Enterococcus faecalis
 C-Glucose、pH-BTB、選択-0.025% 窒化Na、テトラゾリウム塩

DHL寒天培地

 腸内細菌科
 N-ペプトン、C-白糖、ブドウ糖、pH-ニュートラル赤、選択-胆汁酸塩、チオ硫酸Na、クエン酸Fe 

マッコンキー寒天培地

 N-ペプトン、C-乳糖、pH-クリスタル紫、選択-胆汁酸塩、チオ硫酸Na、クエン酸Fe
 E.coli・・・乳糖⇒酸 混濁、レンガ紅色
 Salmonella・・・乳糖非分解 無色コロニー
 Shigella・・・胆汁酸析出なし

SS寒天培地

 N-ペプトン、C-乳糖、pH-ブリリアント緑、選択-胆汁酸塩、チオ硫酸Na、クエン酸Fe 

NAC寒天培地

 Pseudomonas aerginosa以外のGPC、GNRを発育抑制
 選択成分−ナリジクス酸、セトリマイド

TCBS寒天培地

 Vibrio科
 C-白糖、pH-BTB、選択-チオ硫酸Na、クエン酸、胆汁酸塩、pH8.6
 黄色コロニー コレラ 
 緑色コロニー 腸炎ビブリオ

ビブリオ寒天培地

 Vibrio科
 C-白糖、pH-クレゾール赤、ウォーター青、選択-チオ硫酸Na、クエン酸、タウロコール酸Na、ラウリル酸Na

サイヤーマーチン

 Nisseria
 バンコマイシン、コリスタチン、ナイスタチン

スキロー培地

 Canphylobacter jejuni
 バンコマイシン、ポリミキシンB、ヒツジ血液5%

荒川培地

 1%亜テルル酸K
 Corinebacterium diphtheriae

レフレル培地

 ウマ血清7.0%
 Corynebacterium diphtheriae

CCFA培地

 Clostridium difficile
 サイクロセリン、セフォキシチン

BCYE寒天培地

 Legionella

PPLO寒天培地

 Mycoplasma
 ウマ血清、2.5%酢酸タリウム、PCGカリウム塩

小川培地

 抗酸菌
 リン酸2水素K・全卵70%

コルトフ培地

 Lestospira

ボルデジャング

 Bordetella
 ジャガイモ、グリセリン

コーンミール寒天培地

 非選択 真菌

サブロー培地

 選択 真菌
 PCG、SM、CP

培地&テスト

グラム陽性球菌
Staphylococcus

 マンニット食塩培地7.5%
 コアグラーゼtest
 バンコマイシン感受性

Streptcoccus

 血液寒天培地、トッドヒューレット、パイク培地
 普通寒天培地×
 pyogenes−バシトラシン感受性試験、ディックテスト
 agaracctie−CAMPテスト
 pneumoniae−オプトヒン感受性、胆汁酸溶解、莢膜膨化test

D群連鎖球菌

 SF培地(胆汁エスクリン加水分解(+)
 EF培地(Enterococcus)6.5%食塩

 

グラム陽性桿菌
Corinebacterium diphtheriae

 荒川培地(1%亜テルル酸K)
 レルフル培地(ウマ血清70%)
 エレクテスト、シックテスト、異染小体(ナイセル染色)、モロニー反応

Nocardia

 小川培地
 サブロー培地

Mycobacterium

 小川培地(マラカイト緑、リン酸2水素K、全卵70%)
 キルヒナー、デュボス(液体培地)
 tubercrosis ・・・ ツベルクリン反応
 leprae ・・・ レプロミン(光田)反応

Bacillus

 パールテスト(縮毛状:R型)

 アスコリ熱沈降反応
Clostridium

 CCFA培地(difficile)
 parfringens ・・・ ナグラー反応(嵐状発育)

 

グラム陰性球菌
Neisseria

 サイヤーマーチン培地(Hb、バンコマイシン、コリスタチン、ナイスタチン)
 チョコレート寒天培地
 普通寒天培地×

 

グラム陰性桿菌
Legionella

 BCYE寒天培地(非選択 ピンポイントコロニー)
 WYO培地(選択培地)

Bordetella

 ボルデジャング培地(ジャガイモ、グリセリン)
 吹き付け平板法
 グンデルテスト

Haemophilus

 衛星現象

Vibrio parahaemolyticus

 神奈川現象

Canpylobactor jejuni

 スキロー培地(バンコマイシン、ポリミキシン、5%SRBC)

 

スピロヘータ
Lestspira

 コルトフ培地(ウサギ血清)

 

Mycoplasma pneumoniae

 PPLO培地(ウマ血清、2-5%酢酸タリウム、PCG、酵母エキス)
 目玉焼きコロニー

 

真菌

 コーンミール寒天
 サブロー培地
 マイコセル寒天培地(CF)

 

人工培地不可

 Mycobacterium lepre ・・・ 培養不可
 Toreponema ・・・ ウサギ睾丸
 クラミジア、リケッチア、ウイルス ・・・ 培養細胞、発育鶏卵、マウス

培地&テストA

検体 ⇒ 分離 ⇒ Gram染色
 グラム陰性桿菌 ⇒ オキシダーゼ試験
 グラム陽性球菌 ⇒ カタラーゼ試験

 

チトクロームオキシダーゼ試験

 2塩酸テトラメチルパラフェニレンジアミン
 オキシダーゼ産生菌⇒インドフェノールブルー

カタラーゼ試験

 3%過酸化水素
 カタラーゼ産生⇒水+酸素

 

O−Fテスト

 1%Glucose、BTB
 ブドウ糖−発酵or酸化的分解?

硫化水素産生

 TSI、クリグラー、SIMの高層部で確認

PPA反応

 フェニルアラニンを基質とする脱アミノ反応
 フェニルピルビン酸
 クエン酸鉄と反応しキレート形成(茶褐色)

IPA反応

 トリプトファンを基質とする脱アミノ反応
 インドールピルビン酸
 クエン酸鉄と反応しキレート形成(茶褐色)

インドール反応

 トリプトファナーゼ産生能
 トリプトファン⇒ピルビン酸+アンモニア+インドール
 インドール+コバック試薬(パラジメチルアミノベンツアルデヒド)
 ⇒ロスインドール(赤)

VP反応

 ブドウ糖⇒ピルビン酸⇒アセトイン(>pH6)
 T液−5%αナフトール
 U液−KOH

MR反応

 ブドウ糖⇒ピルビン酸⇒強酸(ギ酸、乳酸、酢酸)
 MR試薬

 

確認培地
TSI寒天培地

 炭素源(ブドウ糖0.1%、乳糖1%、白糖1%)
 窒素源(ペプトン)
 pH(フェノールレッド)
 硫化水素(チオ硫酸Na、硫酸第一鉄、亜硫酸Na)
 硫化水素産生能、ガス産生性、糖の分解性

マロン酸塩培地

 炭素源(マロン酸Na、ブドウ糖)
 窒素源(硫酸アンモニウム)
 pH(BTB)
 リン酸緩衝液
 マロン酸を利用⇒アルカリ化(青)
 klebsiella、Enterobacter

シモンズのクエン酸培地

 炭素源(クエン酸Na)
 窒素源(リン酸2水素アンモニウム)
 pH(BTB)
 クエン酸利用⇒アルカリ化(青)

 

窒素源利用能
SIM培地

 窒素源(ペプトン)
 硫化水素(チオ硫酸Na)
 運動性、硫化水素産生、IPA反応、インドール反応

LIM培地

 窒素源(ペプトン)
 炭素源(ブドウ糖、L-lysine)
 pH(BCP)
DNエース
 DNA-トルイジンブルー
 DNase産生能
 DNA分解酵素によりDNA+トルイジンブルー(赤紫)